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dc.contributor.advisorArisqueta Herranz, Lino-
dc.contributor.authorMichelena Tupiza, Stephanie Belen-
dc.date.accessioned2021-11-12T19:32:43Z-
dc.date.available2021-11-12T19:32:43Z-
dc.date.issued2021-10-
dc.identifier.citationCT-CBIO M623ef/2021es
dc.identifier.urihttps://repositorio.uisek.edu.ec/handle/123456789/4484-
dc.descriptionLa lactoferrina (Lf) es una glicoproteína presente en la leche materna con múltiples funciones, que incluyen defensa inmune contra patógenos, actividad inmunomoduladora y regulación del crecimiento celular. Durante la inflamación, los neutrófilos polimorfonucleares (PMN) se reclutan en el sitio de la infección. Una vez que los PMN llegan al sitio, liberan especies reactivas de oxígeno (ROS) para ayudar en la eliminación del patógeno bacteriano. Sin embargo, los radicales reactivos de oxígeno no solo son perjudiciales para las células bacterianas, sino que también dañan el tejido del huésped que en consecuencia liberan hierro férrico y ferroso. Este hierro libre genera nuevos radicales libres, perpetuando aún más el daño. En la infección de Helicobacter pylori, bacteria gramnegativa microaerofílica que afecta el epitelio gástrico, la incapacidad del huésped para eliminar la infección resulta en un estado inflamatorio crónico con estrés oxidativo continuo dentro del tejido que puede provocar, entre otros trastornos, el desarrollo de cáncer gástrico. Se cree que la lactoferrina juega un papel crucial en la prevención de daños por ROS al quelar el hierro liberado por el tejido herido, lo que resulta en la mitigación del estrés oxidativo en el sitio de la inflamación. Objetivo: Este trabajo tiene como objetivo determinar el efecto protector de la lactoferrina frente a infección de H. pylori en células gástricas in vitro. Métodos: Se emplearán las líneas celulares MKN74 (Adenocarcinoma tubular gástrico), MKN28 (Adenocarcinoma tubular gástrico) y AGS (Adenocarcinoma tubular gástrico). Se procederá a generar un modelo de daño oxidativo por H2O2 que imite el daño producido por la infección de H. pylori y se determinará la concentración óptima de H2O2 para los futuros ensayos. A partir de estos datos también determinaremos la concentración óptima de Lf que proteje contra el estrés oxidativo y que emplearemos en los ensayos futuros. Para el análisis de la viabilidad se empleará microscopía y MTT; para el análisis del estrés oxidativo y la inducción de marcadores relacionados con la protección frente al mismo, se emplearán kits enzimáticos comerciales (SOD, catalasa, iNOS, GPX, GSH, etc.); y se analizará la expresión de los genes implicados mediante RT – PCR y/o western blot. Después, se procederá a implementar el co – cultivo de células gástricas y H. pylori, es decir, nuestro modelo de infección, con el objetivo de determinar el efecto protector de la Lf contra esta bacteria. Para analizar el efecto protector de la Lf y el daño ocasionado por la infección se recurrirá a las pruebas descritas más arriba. Además, se determinará la curva de crecimiento bacteriano en presencia y ausencia de Lf. Resultados esperados: Se espera establecer un modelo de daño oxidativo mediante H2O2 que asemeje los daños producidos por H. pylori in vitro. Al evaluar el efecto protector de la Lf contra el estrés oxidativo in vitro, se espera que éste disminuya con el tratamiento de la Lf. Además, se espera generar un modelo de infección mediante co–cultivo de H. pylori y células gástricas in vitro. Al evaluar el efecto protector de Lf frente a la infección de H. pylori, se espera obtener los mismos resultados o similares que con H2O2, es decir, un efecto protector contra las consecuencias de la infección. También se espera que la Lf tenga un efecto negativo directamente sobre el crecimiento bacteriano. Finalmente, se espera también determinar lo mecanismos por los cuales la Lf redujo el daño oxidativo y la propia infección por H. pylori.es
dc.description.abstractLactoferrin (Lf) is a glycoprotein found in human milk which has multiple functions, including immune defence against pathogens, immunomodulatory activity and regulation of cell growth. During inflammation, polymorphonuclear neutrophils (PMNs) are recruited at the site of infection. Once PMNs reach the site, reactive oxygen species (ROS) is released to aid in the elimination of the bacterial pathogen. However, reactive oxygen radicals are not only harmful to bacterial cells, but also to the host tissue which as a result releases ferric and ferrous iron. This free iron generates new free radicals, further perpetuating the damage. In Helicobacter pylori infection, a microaerophilic gram-negative bacterium that affects the gastric epithelium, the inability of the host to eliminate the infection results in a chronic inflammatory state with continuous oxidative stress present within the tissue that can cause, among other disorders, the development of gastric cancer. It is believed that Lf plays a crucial role in preventing ROS damage by chelating iron released from injured tissue, resulting in the mitigation of oxidative stress at inflammation site. Objective: We aim to determine the protective effect of lactoferrin against H. pylori infection in gastric cells in vitro. Methods: The cell lines MKN74 (gastric tubular adenocarcinoma), MKN28 (gastric tubular adenocarcinoma) and AGS (gastric tubular adenocarcinoma) will be used. A model of oxidative damage by H2O2 will be generated in order to mimic the damage caused by H. pylori infection and the optimal concentration of H2O2 will be determined for future assays. From these data we will also determine the optimal concentration of Lf that protects against oxidative stress. Microscopy and MTT will be used for the viability analysis. For the analysis of oxidative stress commercial enzymatic kits (SOD, catalase, iNOS, GPX, GSH, etc.) will be used; and the expression of the genes involved will be analyzed by RT-PCR and / or western blot. Then, we will proceed to implement the co-culture between gastric cells and H. pylori, being this our infection model to determine the protective effect of Lf against this bacterium. To analyze the protective effect of Lf and the damage caused by the infection, the tests described above will be used. In addition, the bacterial growth curve will be determined in the presence and absence of Lf. Expected results: We expect to develop an in vitro model of oxidative damage by H2O2 that resembles the damage caused by H. pylori. When evaluating the protective effect of Lf it is expected that the oxidative stress will decrease with the treatment of Lf. Furthermore, we will generate an infection model by co-culturing H. pylori and gastric cells in vitro, expecting to obtain the same or similar results as with H2O2. Lf is also expected to have a direct negative effect on bacterial growth. Finally, we will determine the mechanisms by which Lf reduced oxidative damage and H. pylori growth.es
dc.description.sponsorshipUisekes
dc.language.isospaes
dc.publisherUniversidad Internacional SEKes
dc.rightsopenAccesses
dc.subjectBIOMEDICINAes
dc.subjectHELICOBACTER PYLORIes
dc.subjectLACTOFERRINAes
dc.subjectESPECIES REACTIVAS DE OXIGENOes
dc.subjectDAÑO OXIDATIVOes
dc.titleEfecto protector de la lactoferrina sobre células gástricas in vitroes
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesises
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